非酒精性脂肪性肝病細胞模型中自噬與脂質代謝的相互調節

<p><b>&ldquo;上海酶聯文獻&rdquo;&nbsp;</b><strong>摘要:</strong></p> <p>目的 探討非酒精性脂肪性肝病( NAFLD) 中自噬與脂質代謝的相互作用。方法 體外人肝細胞培養( 脂肪變性) 制備 NAFLD 細胞模型，雷帕霉素誘導細胞自噬，3 － 甲基腺嘌呤抑制細胞自噬，MTT 比色法測定細胞活力，ELISA 法檢測各組細胞 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平，IF 法檢測 LC3 － 的定位與分布，Western Blot 檢測 LC3 － / LC3 － 比值。計量資料多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用 SNK － q 檢驗。結果 誘導自噬組的吸光度值和細胞活率與脂肪變組比較，明顯下降( HL － 7702 細胞 q 值分別為 4． 160、4． 110，SK － HEP － 1 細胞 q 值分別為 4． 407、4． 032; P 值均 ＜ 0． 05) 。脂肪變組 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平與對照組相比，明顯升高( HL － 7702 細胞 q 值分別為 5． 316、3． 730、4． 013、6． 967、6． 192、5． 531，SK － HEP － 1 細胞 q 值分別為 4． 963、3． 603、4． 774、7． 479、6． 319、5． 193; P 值均 ＜ 0． 05) 。誘導自噬組 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平與脂肪變組相比，明顯降低( HL － 7702 細胞 q 值分別為 4． 978、3． 695、3． 960、5． 130、4． 695、3． 192，SK － HEP － 1 細胞 q 值分別為 3． 846、5. 575、4. 184、5． 019、4. 203、3． 049;P值均 ＜ 0． 05) 。LC3 － 在各組肝細胞中的標記值，誘導自噬組最高( HL － 7702 細胞為 90． 1% ，SK － HEP － 1 細胞為 80. 0% ) ，其次是脂肪變組( HL － 7702 細胞為 47． 2% ，SK － HEP － 1 細胞為 48． 4% ) 及抑制自噬組( HL － 7702 細胞為 30． 2% ，SK － HEP － 1 細胞為 45. 5% ) 。誘導自噬組 LC3 － / LC3 － 比值與脂肪變組相比，明顯升高( HL － 7702 細胞 q 值為 6. 786，SK － HEP － 1 細胞q 值為5． 926; P值均 ＜ 0． 05) 。結論 自噬的上調有利于促進肝臟脂肪的清除，而下調則促進脂質的聚積。&nbsp;</p> <p><img src="/images/upload/Image/8888.png" width="341" height="325" alt="" /></p> <p><strong>1材料與方法</strong><br /> 材料 HL － 7702 細胞和 SK － HEP － 1 細胞株( 西安東澳生物科技有限公司) ，10% 脂肪乳注射液( 四川科倫藥業股份有限公司) ，雷帕霉素 ( Selleck，S1039) ，3 － 甲基腺嘌呤 ( 3 － MA) ( Selleck，S2767) ，LC3B ( D11 ) XP Ｒabbit mAb ( CST，3868S) ，Anti －PKC epsilon 抗體( Abcam，ab124806) ，油紅 O 染色液( 南京建成科技有限公司，D027 ) ，科研人甘油三酯( TG) ELISA 試劑盒 ( 上海酶聯生物科技有限公司，ml026468) ，科研人 ALT 檢測試劑盒 ( 上海酶聯生物科技有限公司，ml027133) ，科研人 AST 檢測試劑盒( 上海酶聯生物科技有限公司，ml024056) ，科研人乳酸脫氫酶( LDH) 檢測試劑盒( 上海酶聯生物科技有限公司，ml024518) ，科研人 GGT 檢測試劑盒( 上海酶聯生物科技有限公司，ml027457) ，科研人 Alb 檢測試劑盒( 上海酶聯生物科技有限公司，ml025061) 。倒置熒光顯微鏡( OLYMPUS) ，冷凍離心機( Eppendorf) ，電熱恒溫培養箱( 天津泰斯特儀器有限公司) ，Mini － PＲO-TEAN Casting stand( Bio － Ｒad) ，Power PacTM HC 高電流電泳儀 ( Bio － Ｒad) ，Mini － PＲOTEAN 電泳槽( Bio － Ｒad) ，Mini Trans － Blot 轉印槽( Bio － Ｒad) ，iMa-rkTM 酶標儀( Bio － Ｒad) 。</p>